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博瑞科生物鴨病毒性肝炎篩選與回歸試驗(yàn)
博瑞科生物
鴨病毒性肝炎篩選與回歸試驗(yàn)
鴨病毒性肝炎病毒篩選
1.1 分離病毒
從不同地區(qū)發(fā)病鴨場(chǎng)內(nèi)解剖感染病例，獲得病毒載量較高的器官--肝臟，經(jīng)研磨過(guò)濾后接種于10日齡鴨胚，鴨胚出現(xiàn)死亡后收獲尿囊液和胚體，經(jīng)研磨離心過(guò)濾后再次接種到10日齡鴨胚，重復(fù)以上過(guò)程，直至該毒株可使鴨胚穩(wěn)定死亡。
1.2 純凈性檢測(cè)
將篩選到的病毒進(jìn)行細(xì)菌、真菌、支原體及其他常見(jiàn)病毒檢測(cè)。
1.3 鴨胚培養(yǎng)與毒價(jià)測(cè)定
將1.1獲得的胚毒用于檢測(cè)病毒毒價(jià)，如表1所示。根據(jù)所得病毒毒價(jià)，將1型毒株分離株1、分離株2、分離株4和3型毒株分離株6、分離株8接種到4日齡雛鴨進(jìn)行動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)。鴨胚半數(shù)致死量（ELD50）用Reed-Muench法計(jì)算。
1.4 動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)
將5個(gè)分離株回歸4日齡雛鴨，各10只，每天記錄死亡情況和剖檢觀察肝臟病變，結(jié)果見(jiàn)表2，將分離株2、分離株4和分離株6作為疫苗待選毒株。
雛鴨攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)
1、2日齡健康未免疫雛鴨40只，由山東博瑞科生物技術(shù)有限責(zé)任公司研發(fā)部提供。
2、鴨病毒性肝炎精制蛋黃抗體（甘維康），由山東博瑞科生物技術(shù)有限責(zé)任公司質(zhì)控部提供。
3、鴨肝炎病毒（1+3）型病毒液，0.2ml含100ID50 ，由山東博瑞科生物技術(shù)有限責(zé)任公司質(zhì)控部提供。
雛鴨攻毒保護(hù)率檢驗(yàn)方法：
把40只2日齡雛鴨，分為1、2、3、4組，每組10只。
1組為健康對(duì)照組，不注射任何藥品，單獨(dú)隔離飼養(yǎng)；2、3組為蛋黃抗體免疫組，每組分別肌肉注射0.5羽份、1羽份卵黃抗體；4組為攻毒對(duì)照組，每只注射生理鹽水0.5ml，隔離飼養(yǎng)。
隔24小時(shí)左右，2、3、4組分別肌肉注射鴨肝炎病毒1+3型病毒液0.2ml，繼續(xù)隔離飼養(yǎng)，觀察10天，記錄死亡鴨子只數(shù)。
雛鴨攻毒保護(hù)率檢驗(yàn)法按暫行規(guī)程要求蛋黃抗體組保護(hù)率80%以上 ，對(duì)照組死亡數(shù)符合要求 ，抗體效價(jià)合格 。以上試驗(yàn)符合試驗(yàn)要求，兩種免疫劑量的雛鴨攻毒保護(hù)率分別為 90%和90%。
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