新型呼腸孤毒株篩選過程：

1 、方法：

1.1 毒株選擇：選擇近幾年不同地區(qū)的分離株 8 株。

1.2 致病性測(cè)定：將 8 株分離株的鴨胚毒分別做 100 倍稀釋，通過腿肌注射 7 日 齡肉鴨，各 5 只，觀察 5 天。攻毒后第 5 天剖檢觀察脾臟病變。

1.3 純化培養(yǎng)：選擇致病力較強(qiáng)的 5 個(gè)毒株用鴨胚成纖維細(xì)胞(DEF)進(jìn)行噬斑 純化后，按常規(guī)方法分別傳 5 代，然后測(cè)定第 5 代次的毒價(jià)(TCID50 )。

1.4 純凈性檢驗(yàn)：將篩選到的兩株病毒進(jìn)行細(xì)菌、支原體和常見病毒純檢測(cè)。

2、測(cè)定

2.1 致病性測(cè)定

將 8 個(gè)分離株回歸 7 日齡肉鴨， 各 5 只， 觀察 5 天。攻毒后第 5 天剖檢觀察 脾臟病變，結(jié)果見表 1，選擇 GT19 、HN22 、YN22 、SC22 、DY23 這 5 個(gè)毒株 進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定試驗(yàn)。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與毒價(jià)測(cè)定

將篩選的 5 株病毒在 DEF 上進(jìn)行連續(xù)傳代，分別取第 5 代次細(xì)胞毒進(jìn)行滴 定，結(jié)果：GT19 株和 SC22的毒價(jià)相對(duì)較高，見表 2。

2.3 純凈性檢測(cè)

GT19 株和 SC22 株均無細(xì)菌、支原體和常見外源病毒污染。

2.4 病毒最佳接種比例

將 GT19 株和 SC22 分別以不同的稀釋度接種DEF，分別滴定毒價(jià)，結(jié)果；GT19 和 SC22 均以 1000 倍稀釋接種細(xì)胞時(shí)，收獲的病毒毒價(jià)最高，見表 3。

3、結(jié)論

3.1 選擇 GT19 和 SC22 兩株病毒作為混合免疫原用于抗體制備， 即考慮了毒株的 致病力和毒價(jià)，又兼顧了毒株的地區(qū)性(北方和南方)；

3.2 毒種的最佳接種比例確定為 1000 倍稀釋，收獲時(shí)間 48-60h。